液相色谱仪测定人血浆中双氯西林和阿莫西林

来源:杭州赛析科技有限公司   时间:-0-0    浏览量:104

 1仪器与试剂 
    杭州赛析501高效液相色谱仪,附紫外检测器UV501;N2010色谱工作站;AT一230色谱柱温箱。双氯西林的网络分析仪和频谱分析仪精制品、阿莫西林精制品(内标氟氯西林精制品(含量94。0%)、内标替硝唑精制品(含量97。2%);甲醇、乙腈均为一级色谱纯,纯度99。9%);水为去离子水;其余试剂均为分析纯。
  2色谱条件
  双氯西林的色谱条件:岛津Shim—packVP—ODS色谱柱(150mm×4。6mm,5);流动相0。05mol-L磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2。7g,溶于1000mL去离子水中,用氢氧化钾溶液调pH4。5,过滤)一乙腈(68:32),加0。3%三乙胺;流速1。0mL·min~;网络分析仪和频谱分析仪检测波长225nm;柱温25;进样量20trL;内标氟氯西林。阿莫西林的色谱条件:岛津Shim—packVP—ODS色谱柱(150mm×4。6mm,5);流动相0。033mol·L磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2。22g、磷酸氢二钾2。610g,溶于1000mL去离子水中用氢氧化钾溶液调pH7。2,过滤)一甲醇(88:12)流速1。0mL·min~;检测波长229nm;柱温20℃进样量20trL;内标替硝唑。
  3血浆样品的处理与测定
  精密移取空白血浆450L,分别加人双氯西林网络分析仪和频谱分析仪或阿莫西林标准工作液50,内标氟氯西林或替硝储备液5,混匀后,加入冷冻的甲醇500,旋涡混合,置于4℃冰箱15min,14000r·min一离心10min,取20L上清液进样。
  4方法与结果
  4。1色谱分离在上述色谱条件下,双氯西林网络分析仪和频谱分析仪及内标氟氯西林与血浆得到完全分离,其保留时间分别为7。1min和5。5min,如图1所示;阿莫西林及内标替硝唑与血浆内源峰得到良好分离,其保留时间分别为8。5min和l6。8min。
  
结论:
  目前,人血浆中阿莫西林的HPLC法报道较多。阿莫西林具有两性化合物的性质,且与血浆中的极性物质性质相近,因此血浆样品预处理与色谱分离十分困难。ZhiYuan等用固相萃取法、CarlqvistJ等¨用柱切换法来进行样品预处理,但仪器设备复杂、操作烦琐。故阿莫西林HPLC法多用直接沉淀蛋白法来处理血样。鉴于本研究需针对同一样本中的2种组分进行分离分析,我们先后考察了高氯酸、乙腈除蛋白,但杂质峰与阿莫西林峰重叠,分离度不理想,最终选用甲醇除蛋白。调控柱温的方式,建立了相同的样品预处理方法,不同的色谱条件分离分析人血浆中双氯西林和阿莫西林的高效液相色谱法。
  关键词:阿莫西林液相色谱仪检测 液相色谱仪 高效液相色谱仪 双氯西林 

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